Imagerie par spectrométrie de masse Maldi

L’imagerie MALDI MS permet de réaliser la cartographie 2D de différents composés endogènes (métabolites, lipides, peptides, protéines) ou exogènes (médicaments, xénobiotiques) par spectrométrie de masse. Cette technologie offre de nombreuses applications dans les domaines de la biologie, la clinique, la pharmacologie, la cosmétologie et l’environnement.

Objectifs

  • Permettre aux participants d’acquérir les bases théoriques et pratiques de l’imagerie par spectrométrie de masse MALDI
  • Aborder sur le plan pratique les différents aspects mis en œuvre dans une séquence d’imagerie, soit la préparation des échantillons, l’acquisition des images puis le traitement des données pour des composés de bas poids moléculaire (médicaments, métabolites, lipides) ou haut poids moléculaire (peptides, protéines)

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Cadres et techniciens

PRÉ-REQUIS

  • Savoir utiliser la spectrométrie de masse
  • Connaître le principe du MALDI

PROGRAMME

Jour 1

Théorie :

  • Imagerie MALDI MS : présentation générale et préparation d’échantillon pour les petits composés (choix de la matrice MALDI et mode de dépôt)

Pratique :

  • Techniques pour la réalisation des sections de tissus (cryostat) et colorations histologiques des tissus (Bleu de toluidine, HES, …)
  • Préparations des échantillons pour l’analyse des petites molécules (médicaments, métabolites, lipides) : dépôt de la matrice par nébulisation automatique
  • Méthodes d’acquisition des images : MALDI-TOF/TOF et/ou MALDI-orbitrap
  • Images des tissus préparés pour l’analyse des petites molécules

Jour 2

Théorie :

  • Imagerie MALDI MS : préparation d’échantillon pour les peptides et les protéines (traitement des tissus, digestions enzymatiques in situ)

Pratique :

  • Préparation des tissus pour l’analyse peptides/protéines : lavages des tissus, digestion enzymatique à la trypsine, dépôt de la matrice par nébulisation automatique et micro-dépôts
  • Méthodes d’acquisition des images (MALDI-TOF/TOF et/ou MALDI-orbitrap)
  • Images des tissus préparés pour l’analyse peptides/protéines

Jour 3

Théorie :

Traitement des données, reconstruction des images, analyses statistiques (ACP, Clustering)

Pratique :

  • Identification des composés : MS/MS in situ et stratégies d’identification par micro-extraction
  • Traitement des données, analyses statistiques, reconstruction des images
  • Table ronde : discussion autour de l’analyse des données recueillies pour les petits composés, les peptides/protéines, l’identification

MÉTHODE PÉDAGOGIQUE

La formation est essentiellement pratique, les participants manipulent en laboratoire.
La formation expérimentale sera complétée par des aspects théoriques traités sous la forme de 2 heures de cours magistraux chaque jour.